- Area di Scienze
- Corso di Laurea Triennale
- Biotecnologie [E0201Q]
- Insegnamenti
- A.A. 2021-2022
- 2° anno
- Laboratorio Tecnologie Abilitanti Immunologiche
- Introduzione
Syllabus del corso
Obiettivi
Il corso si propone di fornire competenze di tecniche Immunologiche di base in ambito biotecnologico. Verranno sviluppate competenze nella manipolazione di linee cellulari di interesse per l'immunologia, nella generazione di anticorpi monoclonali e nella rilevazione di antigeni attraverso metodi e strumenti di ampio utilizzo nel campo immunologico.
Attraverso la frequenza del modulo di LTA-Immunologiche gli studenti potranno raggiungere i seguenti obiettivi:
Conoscenze e capacità di comprensione.
Consolidare ed approfondire conoscenze di base (teoriche, tecniche e metodologiche) nell'ambito dell'immunologia.
Capacità di applicare conoscenze e comprensione.
Interpretare correttamente i protocolli sperimentali oggetto dell'esperienza (isolamento di cellule e allestimento di linee cellulari, saggi di proliferazione, preparazione di ibridomi, identificazione di antigeni cellulari etc), e riconoscerne gli aspetti salienti; eseguire i protocolli sperimentali proposti, in ottemperanza di buone pratiche di laboratorio e di norme di sicurezza; raccogliere ed elaborare i dati sperimentali.
Autonomia di giudizio.
Riconoscere il disegno sperimentale, considerarne i punti critici; valutare criticamente i risultati ottenuti; riconoscere i contesti di applicazione dei metodi sperimentali considerati.
Abilità comunicative.
Rielaborare i dati sperimentali ottenuti; descrivere efficacemente le procedure ed i risultati, utilizzando il linguaggio tecnico più appropriato.
Capacità di apprendimento.
Riconoscere e interpretare correttamente protocolli sperimentali analoghi a quelli già eseguiti praticamente, la cui applicazione sia richiesta in contesti diversi (ad esempio, in un laboratorio sperimentale).
Contenuti sintetici
Questa unità didattica intende introdurre gli studenti alle principali tecniche immunologiche.
Le tecniche prese in considerazione sono:
- coltivazione e valutazione della vitalità di linee cellulari
- preparazione di ibridomi e produzione di anticorpi monoclonali
- separazione di popolazioni cellulari (linfociti e monociti/macrofagi),
- saggi di linfoproliferazione (Reazione Linfocitaria Mista, MLR)
- saggi immunoenzimatici per analisi quantitative di antigeni e anticorpi (ELISA).
Gli studenti saranno introdotti all'utilizzo di cappe biologiche (biohazard di classe II) sterili, incubatori a CO2, centrifughe da banco, colture cellulari, microscopi, spettrofotometri.
Programma esteso
Questa unità didattica intende introdurre alle principali tecniche immunologiche.
Saranno illustrate norme di sicurezza operativa e personale, tecniche operative in sterilità, funzionamento di cappe biologiche (biohazard classe II), utilizzo di incubatori a CO2, centrifughe da banco, microscopi, spettrofotometri.
Le tecniche immunologiche considerate sono:
- Allestimento di colture cellulari;
- Mantenimento in colture di linee cellulari aderenti (macrofagi/monociti) e in sospensione (linfociti).
- Separazione cellulare mediante Sorting Magnetico (utilizzo di biglie magnetiche rivestite da anticorpi)
- Produzione di anticorpi monoclonali: metodi di immunizzazione, effetti della dose degli antigeni, adiuvanti e fusione cellulare per la generazione di ibridomi.
- Caratterizzazione della specificità antigenica della frequenza e della funzione: colture con diluizione limite.
- Rilevamento, misurazione e caratterizzazione degli anticorpi e il loro uso nella ricerca e nella diagnostica
- test per l'identificazione dell'antigene (ELISA diretto)
- test per l’identificazione di anticorpi (ELISA indiretto)
Prerequisiti
Prerequisiti: frequenza del corso di Immunologia (secondo anno, I semestre)
Propedeuticità specifiche: nessuna
Propedeuticità generali: lo studente potrà sostenere gli esami del secondo anno di corso solo previo superamento degli esami di Istituzioni di Biologia, Chimica generale ed inorganica, Matematica, Lingua Straniera.
Modalità didattica
Questo modulo didattico viene erogato attraverso lezioni pratiche che si svolgono presso un laboratorio didattico. L’esecuzione di esperimenti è preceduta da brevi lezioni introduttive di ciascun argomento ed è seguita dalla discussione dei risultati sperimentali.
L'insegnamento è tenuto in lingua italiana.
Materiale didattico
Il materiale didattico (dispense) è disponibile sulla piattaforma e-learning dell'unità didattica di LTA-Immunologiche.
Periodo di erogazione dell'insegnamento
Secondo semestre
Modalità di verifica del profitto e valutazione
Esame scritto.
Le conoscenze teoriche e pratiche saranno verificate mediante problemi e domande aperte.
Orario di ricevimento
Ricevimento: su appuntamento, previa richiesta per mail ai docenti.
Aims
The course provides some basic theoretical knowledges and practical skills on Immunological techniques.
Students will be trained in the manipulation of cell lines of interest for immunology, in the generation of monoclonal antibodies and in the detection of antigens through methods and tools typically used by immunologists. Students attending the LTA-Immunology practical course are expected to achieve the following aims:
Knowledge and understanding.
Consolidate and deepen basic knowledge (theoretical, technical and methodological) in the field of Immunology.
Applying knowledge and understanding.
Correctly interpret the experimental protocols (cell line isolation and cultivation, proliferation assays, preparation of hybridoma, identification of cellular antigens etc) and recognize their relevant aspects; carry out the proposed experimental protocols in compliance with good laboratory practices and safety standards; collect and process experimental data.
Making judgements.
Recognize the experimental design, consider its critical points; critically evaluate the results obtained; recognize the contexts of application of the experimental methods carried out.
Communication skills.
Re-elaborate experimental data, effectively describe experimental procedures and results, using an appropriate technical vocabulary.
Learning skills.
Recognize and give a correct interpretation to experimental protocols similar to those practically performed, in a different context (i.e., a reserch laboratory).
Contents
This teaching module aims at introducing students to main immunological techniques.
Students wil be trained on the following techniques:
- cultivation and evaluation of the viability of cell lines
- preparation of hybridomas and monioclonal antibody production
- separation of cellular populations (lymphocytes and monocytes / macrophages),
- lymphoproliferation assay (Mixed Lymphocyte Reaction, MLR)
- Enzyme immunoassays for quantitative analysis of antigens and antibodies (ELISA).
Students will be introduced to the use of sterile biological hoods (biohazard di classe II), CO2 incubators, bench centrifuges, cell cultures, microscopes, spectrophotometers
Detailed program
This teaching unit aims to introduce the main immunological techniques.
Operating and personal safety standards will be illustrated together with sterile operating techniques, use of sterile biological hoods (class II biohazard), CO2 incubators, bench centrifuges, microscopes, spectrophotometers.
The immunological techniques considered are:
- Preparation of cell cultures;
- Maintenance in cultures of adherent cell lines (macrophages / monocytes) and in suspension (lymphocytes).
- Cell separation by Magnetic Sorting (use of magnetic beads coated with antibodies)
- Production of monoclonal antibodies: immunization methods, effects of antigen doses, adjuvants and cell fusion for hybridoma generation.
- Characterization of antigenic specificity of frequency and function: cultures with limit dilution.
- Detection, measurement and characterization of antibodies and their use in research and diagnostics
- Antigen identification test (direct ELISA)
- Antibody identification test (indirect ELISA).
Prerequisites
Background: attendance to the Immunology course (second year, I semester)
Specific prerequisites: none
General prerequisites: Students can take the exams of the second year after passing the examinations of Introductory Biology, General and Inorganic Chemistry, Mathematics, and Foreign Language.
Teaching form
This learning unit is addressed through practical lessons which are carried out in a teaching laboratory. At the beginning of each lesson, theory, aims and experimental design will be exposed. At the end of experimental experience, a discussion of collected results will be guided by the teacher.
Teaching language: italian.
Textbook and teaching resource
Learning material (handouts) is available at the e-learning platform of LTA-Immunology module.
Semester
Second semester
Assessment method
Written examinination. Practical and theoretical knowledge will be assessed though open questions and problems.
Office hours
Contact: on demand, upon request by mail to lecturers
Scheda del corso
Staff
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Maguie El Boustani
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Francesca Mingozzi
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Lucia Salvioni
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Francesco Strati
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Giulia Stucchi
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Mihai Valache