Approcci metodologici in biochimica clinica e biologia molecolare clinica. Dosaggi basati su: enzimi, immunometria, pcr; rilevazione e amplificazione del segnale: vantaggi e svantaggi dei differenti format analitici; elettroforesi mono e bi-dimensionale; western blotting; “protein array”.

Esercitazione pratica in laboratorio:

1 – ricerca di proteine specifiche in campioni biologici mediante anticorpi: separazione di proteine provenienti da campioni biologici mediante elettroforesi su gel di poliacrilamide (SDS-PAGE), trasferimento delle proteine dal gel ad un filtro (Western Blotting), immunodecorazione con anticorpi specifici per l’identificazione e la quantificazione di proteine di interesse, rilevamento del segnale proveniente dalla proteina di interesse tramite saggio in chemiluminescenza, acquisizione dell’immagine con CCD camera;

2 - uso di enzimi in diagnostica: funzionamento dello spettrofotometro per studiare lo spettro di assorbimento di sostanze attive otticamente (NAD⁺ e NADH/H⁺); misurazione della concentrazione di una sostanza attiva otticamente (NADH/H⁺) mediante la legge di Lambert&Beer e il coefficiente di estinzione molare; dosaggio della concentrazione dell’enzima Lattico deidrogenasi in campioni di siero, in cinetica, osservando la variazione nel tempo del NADH/H⁺. Dosaggio del substrato mediante enzimi: dosaggio del glucosio con il metodo colorimetrico della Glucosio Ossidasi accoppiata alla Perossidasi di rafano: lettura del saggio allo spettrofotometro.