Course Syllabus
Obiettivi
Il corso di Immunologia II fornisce agli studenti la conoscenza teorica di alcune tecniche base di laboratorio di immunologia cellulare e molecolare. Al termine del corso lo studente sarà in grado di comprendere come funzionano alcune tecniche di laboratorio.
Contenuti sintetici
• Isolamento di leucociti da campioni di sangue
• Produzione di anticorpi monoclonali e policlonali. Anticorpi monoclonali e loro applicazioni.
• Interazione antigene-anticorpo, Immunofluorescenza diretta e indiretta.
• Saggi immunologici: immunoblotting, immunoprecipitazione, agglutinazione ed emoagglutinazione, saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA).
Programma esteso
Reazioni di agglutinazione: emoagglutinazione e gruppi sanguigni, test antiglobulinico diretto (Coomb diretto) e indiretto (Coombs indiretto) per la ricerca di anticorpi contro gli antigeni dei globuli rossi, malattia emolitica del neonato (HDN), test di compatibilità pretrasfusionale.
Saggi immunologici: saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), saggio ELISA per il rilevamento di anticorpi ADAMTS-13 e anti-ADAMTS-13 nella porpora trombotica trombocitopenica, saggio ELISA per il rilevamento di anticorpi anti-PF4 indotti da eparina e loro caratterizzazione funzionale: descrizione di un caso .
Isolamento di leucociti da campioni di sangue: Cluster di differenziazione, isolamento di linfociti del sangue periferico e leucociti polimorfonucleati mediante frazionamento in gradiente di densità, isolamento dei linfociti mediante biglie magnetiche rivestite di anticorpi, leucaferesi e produzione di CAR-T
Citometria a flusso e analisi FACS: principi e applicazioni: immunofenotipizzazione dei leucociti, immunofenotipizzazione delle piastrine per malattie emorragiche rare, sottopopolazioni linfocitarie in campioni di sangue periferico, sottopopolazioni linfocitarie nel liquido di lavaggio broncoalveolare, rilevazione dell'emoglobina fetale, tipizzazione HLA-B27.
Reazioni di precipitazione : Titolazione anticorpale nel siero, saggi di flocculazione e VDRL, precipitazione in agar e test di Ouchterlony, immunodiffusione radiale (RID) e sua applicazione alla misurazione dell'antitrombina nel plasma.
Immunoblotting (western blotting): principi e applicazioni, saggio Western Blot per le proteine del virus dell'HIV.
Prerequisiti
Conoscenze relative a basic immunology.
Modalità didattica
10 esercitazioni da 1 ora svolte in modalità erogativa in presenza.
10 esercitazioni da 2 ore svolte in modalità interattiva in presenza.
Materiale didattico
Pubblicazioni scientifiche, presentazioni in power point e video didattici preparati dal docente.
Periodo di erogazione dell'insegnamento
Secondo semestre.
Modalità di verifica del profitto e valutazione
Le conoscenze acquisite saranno oggetto delle prove in itinere di IMMUNOLOGY-I. Sono previste prove composte da 13 quiz a risposta multipla e 1 domanda aperta. Verrà valutato il livello di conoscenza generale degli argomenti trattati durante le esercitazioni. Il superamento delle prove avverrà secondo le modalità descritte nel Syllabus Generale di "Basic Pathology".
Orario di ricevimento
L'appuntamento con gli studenti sarà fissato inviando una mail al seguente indirizzo: mmarchetti@asst-pg23.it
Sustainable Development Goals
Aims
The Immunology II course provides students with the theoretical knowledge of some basic cell and molecular immunology laboratory techniques. At the end of the course the student will be able to understand how some laboratory techniques work.
Contents
• Isolation of leukocytes from blood samples
• Monoclonal and polyclonal antibody production. Monoclonal antibodies and their applications.
• Antigen-antibody interaction, direct and indirect immunofluorescence.
• Immunoassays: immunoblotting, immunoprecipitation, agglutination and haemagglutination, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Detailed program
Agglutination reactions: Hemagglutination and blood typing, The Coombs direct and indirect tests, Hemolytic disease of the newborn (HDN), pretransfusion compatibility tests.
Immunoassays: enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), ELISA detection of ADAMTS-13 and anti-ADAMTS-13 antibodies in thrombotic thrombocytopenic purpura, ELISA assay for detection of heparin-induced PF4 antibodies and their functional characterization: a case description.
Isolation of leukocytes from blood samples: Cluster of differentiation, isolation of peripheral blood lymphocytes and polymorphonuclear leukocytes by density-gradient fractionation, lymphocyte isolation using antibody coated magnetic beads, leukapheresis and CAR-T production.
Flow cytometry and FACS analysis: principles and applications: immunophenotyping of leukocytes, imuunophenotyping of platelets for rare bleeding disorders, lymphocyte subpopulations in peripheral blood samples, lymphocyte subpopulations in bronchoalveolar lavage fluid, fetal hemoglobin detection, HLA-B27 typing.
Precipitation reactions : Antibody titration in serum, Flocculation Assays and VDRL, Precipitation in agar and The Ouchterlony test, Radial immunodiffusion (RID) and its application to antithrombin measurement in plasma.
Immunoblotting (western blotting): principles and applications, Western Blot assay for HIV proteins.
Prerequisites
Knowledge related to basic immunology
Teaching form
10 exercises of 1-hour carried out in person.
10 exercises of 2-hour carried out in interactive mode in person.
Textbook and teaching resource
Scientific publications, power point presentations and educational videos prepared by the teacher.
Semester
Second semester.
Assessment method
The knowledge acquired will be the subject of ongoing tests of IMMUNOLOGY-I. There are tests consisting of 13 multiple choice quizzes and 1 open question. The level of general knowledge of the topics covered during the exercises will be assessed. Passing the tests will take place according to the methods described in the General Syllabus of "Basic Pathology".
Office hours
The appointment for students will be set by email to the Prof at: mmarchetti@asst-pg23.it
Sustainable Development Goals
Staff
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Marina Marchetti
